Клеточная селекция
Клеточная селекция
Клеточная селекция основана на высокой изменчивости популяции соматических клеток, усилении изменчивости с помощью различных мутагенов и на разработке селективных систем, позволяющих выявить и отобрать генетически измененные клоны клеток (мутантные, рекомбинантные и др.). Благодаря свойству тотипотентности из этих клеток регенерируют целые растения.
Спонтанные мутации в популяции клеток наблюдаются редко, поэтому для повышения частоты мутаций используют индуцированный мутагенез. Получение мутантных форм при использовании селекции на клеточном уровне складывается из следующих этапов: 1) обработка мутагеном суспензии клеток или протопластов- 2) перенесение суспензии в селективные условия- 3) выделение развивающихся колоний- 4) отбор измененных резистентных к селективному фактору клонов- 5) индукции органогенеза- 6) регенерация измененных растений.
Методом клеточной селекции получены: линии кукурузы, устойчивые к гельминтоспориозу- линии картофеля: резистентные к фитофторе- растения табака, устойчивые к вирусу табачной мозаики. В культуре клеток получены мутанты с повышенным синтезом незаменимых аминокислот. Так, отобраны штампы клеток моркови и табака, синтезирующие в 20-30 раз больше свободного триптофана по сравнению с исходными родительскими культурами. Этим способом получен целый ряд клеточных линий картофеля, моркови, риса, способных к сверхсинтезу лизина, метионина, пролина, фенилаланина, глицина. Это реальный путь создания растений с повышенным содержанием аминокислот, особенно незаменимых. Используя различные селективные системы, можно вести направленную селекцию по различным хозяйственно-ценным признакам, как то устойчивость к гербицидам, болезням, к различным стрессовым воздействиям (засоление, затопление, низкие и высокие температуры и др.)
Для получения мутантов в каждом случае необходимо разработать схему селекции и доказать генетическую природу измененных клеточных линий. Полученные изменения не всегда бывают связаны с мутациями, а могут носить модификационный характер и не наследоваться. Доказательством мутации является совокупность следующих критериев: 1)частота спонтанно измененных клеток должна быть очень низка- 2) она значительно повышается при использовании мутагенов- 3) измененные клетки способны делиться и длительно расти- 4)стабильность измененного признака сохраняется и при отсутствии селективного давления- 5) обнаруживается продукт измененного гена (морфологические и биохимические маркеры).
Эффективность мутагена в культуре тканей повышается на гаплоидном уровне благодаря проявлению всех рецессивных мутаций в ранних поколениях, а также в культуре протопластов из-за их выравненности при изолировании из однородных тканей. Особенно перспективными источником выделения разнообразных мутаций являются протопласты гаплоидных растений.
Мутагенез и клеточная селекция как в случае соматических, так и половых клеток являются эффективными способами получения генетически измененных форм и новых сортов растений.
В результате генетической изменчивости in vitro возникают сомоклональные варианты – растения, отклоняющиеся от родительского типа. Сомоклональная вариабельность имеет несколько причин: перемещение подвижных генетических элементов, инверсии, траслокации, делеции, генные перестройки, связанные с дифференцировкой, соматической кроссинговер. Наследственная изменчивость в культуре клеток может иметь не только генетическую, но и эпигенетическую природу, то есть возникает вследствие изменения действия генов.
Особый интерес представляют сомоклоныльные варианты злаков как источник получения ценных генотипов. Получены линии пшеницы, ячменя, риса, варьирующие по таким очень консервативным признакам, как высота растений, длина остей, окраска зерна, форма колоса, электрофоретические спектры запасных белков. Сомоклональные варианты успешно используются как эффективный источник изменчивости для улучшения сортов сельскохозяйственных культур.
